Меню Рубрики

Как правильно установить освещение поля зрения микроскопа

Тема: Устройство микроскопа и правила работы с ним

Материалы и оборудование. Микроскопы: МБР-1, БИОЛАМ, МИКМЕД-1, МБС-1; комплект постоянных микропрепаратов «Анатомия растений».

Микроскоп — это оптический прибор, позволяющий получить обратное изображение изучаемого объекта и рассмотреть мелкие детали его строения, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности глаза.

Разрешающая способность микроскопа дает раздельное изображение двух близких друг другу линий. Невооруженный человеческий глаз имеет разрешающую способность около 1/10 мм или 100 мкм. Лучший световой микроскоп примерно в 500 раз улучшает возможность человеческого глаза, т. е. его разрешающая способность составляет около 0,2 мкм или 200 нм.

Разрешающая способность и увеличение не одно и тоже. Если с помощью светового микроскопа получить фотографии двух линий, расположенных на расстоянии менее 0,2 мкм, то, как бы не увеличивать изображение, линии будут сливаться в одну. Можно получить большое увеличение, но не улучшить его разрешение.

Различают полезное и бесполезное увеличения. Под полезным понимают такое увеличение наблюдаемого объекта, при котором можно выявить новые детали его строения. Бесполезное — это увеличение, при котором, увеличивая объект в сотни и более раз, нельзя обнаружить новых деталей строения. Например, если изображение, полученное с помощью микроскопа (полезное!), увеличить еще во много раз, спроецировав его на экран, то новые, более тонкие детали строения при этом не выявятся, а лишь соответственно увеличатся размеры имеющихся структур.

В учебных лабораториях обычно используют световые микроскопы, на которых микропрепараты рассматриваются с использованием естественного или искусственного света. Наиболее распространены световые биологические микроскопы: БИОЛАМ, МИКМЕД, МБР (микроскоп биологический рабочий), МБИ (микроскоп биологический исследовательский) и МБС (микроскоп биологический стереоскопический). Они дают увеличение в пределах от 56 до 1350 раз. Стереомикроскоп (МБС) обеспечивает подлинно объемное восприятие микрообъекта и увеличивает от 3,5 до 88 раз.

В микроскопе выделяют две системы: оптическую и механическую (рис. 1). К оптической системе относят объективы, окуляры и осветительное устройство (конденсор с диафрагмой и светофильтром, зеркало или электроосветитель).

Рис. 1. Устройство световых микроскопов:

1 — окуляр, 2 — тубус, 3 — тубусодержатель, 4 — винт грубой наводки, 5 — микрометренный винт, 6 — подставка, 7 — зеркало, 8 — конденсор, ирисовая диафрагма и светофильтр, 9 — предметный столик, 10 — револьверное устройство, 11 — объектив, 12 — корпус коллекторной линзы, 13 — патрон с лампой, 14 — источник электропитания.

Объектив — одна из важнейших частей микроскопа, поскольку он определяет полезное увеличение объекта. Объектив состоит из металлического цилиндра с вмонтированными в него линзами, число которых может быть различным. Увеличение объектива обозначено на нем цифрами. В учебных целях используют обычно объективы х8 и х40. Качество объектива определяет его разрешающая способность.

Окуляр устроен намного проще объектива. Он состоит из 2-3 линз, вмонтированных в металлический цилиндр. Между линзами расположена постоянная диафрагма, определяющая границы поля зрения. Нижняя линза фокусирует изображение объекта, построенное объективом в плоскости диафрагмы, а верхняя служит непосредственно для наблюдения. Увеличение окуляров обозначено на них цифрами: х7, х10, х15. Окуляры не выявляют новых деталей строения, и в этом отношении их увеличение бесполезно. Таким образом, окуляр, подобно лупе, дает прямое, мнимое, увеличенное изображение наблюдаемого объекта, построенное объективом.

Для определения общего увеличения микроскопа следует умножить увеличение объектива на увеличение окуляра.

Осветительное устройство состоит из зеркала или электроосветителя, конденсора с ирисовой диафрагмой и светофильтром, расположенных под предметным столиком. Они предназначены для освещения объекта пучком света.

Зеркало служит для направления света через конденсор и отверстие предметного столика на объект. Оно имеет две поверхности: плоскую и вогнутую. В лабораториях с рассеянным светом используют вогнутое зеркало.

Электроосветитель устанавливается под конденсором в гнездо подставки.

Конденсор состоит из 2-3 линз, вставленных в металлический цилиндр. При подъеме или опускании его с помощью специального винта соответственно конденсируется или рассеивается свет, падающий от зеркала на объект.

Ирисовая диафрагма расположена между зеркалом и конденсором. Она служит для изменения диаметра светового потока, направляемого зеркалом через конденсор на объект, в соответствии с диаметром фронтальной линзы объектива и состоит из тонких металлических пластинок. С помощью рычажка их можно то соединить, полностью закрывая нижнюю линзу конденсора, то развести, увеличивая поток света.

Кольцо с матовым стеклом или светофильтром уменьшает освещенность объекта. Оно расположено под диафрагмой и передвигается в горизонтальной плоскости.

Механическая система микроскопа состоит из подставки, коробки с микрометренным механизмом и микрометренным винтом, тубуса, тубусодержателя, винта грубой наводки, кронштейна конденсора, винта перемещения конденсора, револьвера, предметного столика.

Подставка — это основание микроскопа.

Коробка с микрометренным механизмом, построенном на принципе взаимодействующих шестерен, прикреплена к подставке неподвижно. Микрометренный винт служит для незначительного перемещения тубусодержателя, а, следовательно, и объектива на расстояния, измеряемые микрометрами. Полный оборот микрометренного винта передвигает тубусодержатель на 100 мкм, а поворот на одно деление опускает или поднимает тубусодержатель на 2 мкм. Во избежание порчи микрометренного механизма разрешается крутить микрометренный винт в одну сторону не более чем на половину оборота.

Тубус или трубка — цилиндр, в который сверху вставляют окуляры. Тубус подвижно соединен с головкой тубусодержателя, его фиксируют стопорным винтом в определенном положении. Ослабив стопорный винт, тубус можно снять.

Револьвер предназначен для быстрой смены объективов, которые ввинчиваются в его гнезда. Центрированное положение объектива обеспечивает защелка, расположенная внутри револьвера.

Тубусодержатель несет тубус и револьвер.

Винт грубой наводки используют для значительного перемещения тубусодержателя, а, следовательно, и объектива с целью фокусировки объекта при малом увеличении.

Предметный столик предназначен для расположения на нем препарата. В середине столика имеется круглое отверстие, в которое входит фронтальная линза конденсора. На столике имеются две пружинистые клеммы — зажимы, закрепляющие препарат.

Кронштейн конденсора подвижно присоединен к коробке микрометренного механизма. Его можно поднять или опустить при помощи винта, вращающего зубчатое колесо, входящее в пазы рейки с гребенчатой нарезкой.

Правила работы с микроскопом

При работе с микроскопом необходимо соблюдать операции в следующем порядке:

1. Работать с микроскопом следует сидя;

2. Микроскоп осмотреть, вытереть от пыли мягкой салфеткой объективы, окуляр, зеркало или электроосветитель;

3. Микроскоп установить перед собой, немного слева на 2-3 см от края стола. Во время работы его не сдвигать;

4. Открыть полностью диафрагму, поднять конденсор в крайнее верхнее положение;

5. Работу с микроскопом всегда начинать с малого увеличения;

6. Опустить объектив 8 — в рабочее положение, т.е. на расстояние 1 см от предметного стекла;

7. Установить освещение в поле зрения микроскопа, используя электроосветитель или зеркало. Глядя одним глазом в окуляр и пользуясь зеркалом с вогнутой стороной, направить свет от окна в объектив, а затем максимально и равномерно осветить поле зрения. Если микроскоп снабжен осветителем, то подсоединить микроскоп к источнику питания, включить лампу и установить необходимую яркость горения;

8. Положить микропрепарат на предметный столик так, чтобы изучаемый объект находился под объективом. Глядя сбоку, опускать объектив при помощи макровинта до тех пор, пока расстояние между нижней линзой объектива и микропрепаратом не станет 4-5 мм;

9. Смотреть одним глазом в окуляр и вращать винт грубой наводки на себя, плавно поднимая объектив до положения, при котором хорошо будет видно изображение объекта. Нельзя смотреть в окуляр и опускать объектив. Фронтальная линза может раздавить покровное стекло, и на ней появятся царапины;

10. Передвигая препарат рукой, найти нужное место, расположить его в центре поля зрения микроскопа;

11. Если изображение не появилось, то надо повторить все операции пунктов 6, 7, 8, 9;

12. Для изучения объекта при большом увеличении, сначала нужно поставить выбранный участок в центр поля зрения микроскопа при малом увеличении. Затем поменять объектив на 40 х, поворачивая револьвер, так чтобы он занял рабочее положение. При помощи микрометренного винта добиться хорошего изображения объекта. На коробке микрометренного механизма имеются две риски, а на микрометренном винте — точка, которая должна все время находиться между рисками. Если она выходит за их пределы, ее необходимо возвратить в нормальное положение. При несоблюдении этого правила, микрометренный винт может перестать действовать;

13. По окончании работы с большим увеличением, установить малое увеличение, поднять объектив, снять с рабочего столика препарат, протереть чистой салфеткой все части микроскопа, накрыть его полиэтиленовым пакетом и поставить в шкаф.

Микроскоп биологический стереоскопический МБС-1 (рис. 2) дает прямое и объемное изображение объекта в проходящем или отраженном свете. Он предназначен для изучения мелких объектов и препарирования их, так как имеет большое рабочее расстояние (расстояние от покровного стекла до фронтальной линзы).

Рис. 2. Устройство микроскопа МБС-1:

1 — окуляр, 2 — винт грубой наводки, 3 — подставка, 4 — зеркало, 5 — предметный столик, 6 — стойка, 7 — оптическая головка, 8 — объектив, 9 — рукоятка переключения увеличения, 10 — бинокулярная насадка, 11 — лампа.

Основная часть микроскопа — оптическая головка. В нижнюю часть ее вмонтирован объектив, состоящий из системы линз, которые можно переключать при помощи рукоятки и этим менять увеличение. Увеличения объектива обозначены цифрами на рукоятке — х0,6, х1, х2, х4, х7. На корпусе головки имеется точка. Для установки нужного увеличения объектива надо цифру на рукоятке совместить с точкой на корпусе головки.

На верхнюю часть головки установлена бинокулярная насадка. Окуляры имеют увеличения х6, х8, х12,5. Для установки удобного для глаз расстояния между окулярами надо раздвинуть или сдвинуть тубусы.

К задней стенке корпуса головки прикреплен кронштейн с реечным механизмом передвижения. Подъем и опускание корпуса головки осуществляется вращением винта. Кронштейн надет на стойку, прикрепленную к подставке.

Для работы в проходящем свете, в корпус подставки вмонтирован отражатель света, с зеркальной и матовой поверхностями. С передней стороны корпуса имеется окно для доступа дневного света. Для искусственного освещения предназначена лампа, которую вставляют или в отверстие с задней стороны корпуса (для проходящего света), или в кронштейн, укрепленный на объективе (для отраженного света).

Столик установлен в круглом окне на верхней поверхности корпуса подставки. Он может быть либо стеклянным (при проходящем свете), либо металлическим, с белой и черной поверхностями (при отраженном свете).

Электронный микроскоп (рис. 3) позволяет рассмотреть строение очень мелких структур, невидимых в световом микроскопе, например, тилакоид в хлоропластах. Его разрешающая способность в 400 раз больше, чем у светового микроскопа. Это достигается за счет потока электронов, вместо видимого света. Различают два типа электронных микроскопов: трансмиссионный (просвечивающий) и сканирующий (дающий объемное изображение микропрепаратов) (рис. 4).


Рис. 3. Электронный микроскоп.

Рис. 4. Снимки, сделанные на электронных микроскопах:

А — тилакоиды в клетках листа кукурузы (трансмиссионный электронный микроскоп); Б — амилопласты в клетках клубня картофеля (сканирующий микроскоп).

Задание 1. Используя микроскопы, таблицы и практикумы, изучить устройство световых микроскопов (МИКМЕД-1, БИОЛАМ и МБС-1) (рис. 1, 2). Запомнить названия и назначение их частей.

Задание 2. При малом и большом увеличениях микроскопа научиться быстро находить объекты на постоянных микропрепаратах.

1. Что такое разрешающая способность микроскопа?

2. Как можно определить увеличение рассматриваемого под микроскопом объекта?

3. В чем отличие микроскопов БИОЛАМ и МБС-1?

4. Перечислить главные части микроскопа БИОЛАМ и МИКМЕД-1. В чем их назначение?

источник

Практическая работа №1.

По дисциплине: «Микробиология, санитария и гигиена в пищевом промышленности». Тема: Изучение устройства микроскопа по рисунку и овладение техникой микроскопирования.

Практическая работа №1

Подготовительная часть

Содержание Время ОМУ
1.Построение. Приветствие. Сообщение задач урока. 2.Строевые упражнения: Выполнение команд «Становись!», «Равняйсь!», «Смирно!», «Вольно!», «Направо!», «Налево!». 2.Ходьба и ее разновидности: а) обычная в) на носках руки на поясе с) на пятках руки за голову д) на внешней стороне стоп 3. Бег и его разновидности: а) обычный в) с высоким подыманием бедра с) с захлестыванием голени д) приставными правым и левым боком г) спиной вперед 4.Перестроение для проведения ОРУ ОРУ – Смотреть приложение №1 30сек 2мин 3мин 3мин 5мин Внешний вид (наличие спортивной формы) Следить за правильной осанкой Бег в среднем темпе
Основная часть
5. Обучать общеобразовательным упражнениям поворотам налево и направо переступанием, прыжком а)имитация упражнений повороты налево и направо переступанием, прыжком в)выполнение упражнениям поворотам налево и направо переступанием, прыжком 6. Закреплять общеобразовательные упражнения размыкание на ширину поднятых в стороны рук. а)выполнение упражнений размыкание на ширину поднятых в стороны рук. 7.Совершенствовать общеобразовательные упражнения расхождение по заранее установленным местам. а)выполнение упражнений расхождение по заранее установленным местам. 8. Совершенствовать бег в чередовании с ходьбой а)выполнения бега в чередовании с ходьбой 9.Игра «Елочки-березки» 5мин 3мин 3мин 3мин 5мин Следить за правильностью выполнения Следить за правильностью выполнения Следить за правильностью выполнения Следить за правильностью выполнения
Заключительная часть
10.Упражнение на восстановление дыхания: Медленная ходьба, на вдохе руки поднять к вверху, на выдохе опустить вниз. 11.Построение. Подведение итогов урока. 12.Домашнее задание 1мин 1мин 30сек Организовать выход из спортивного зала Подвижные игры

Тема: Изучение устройства микроскопа по рисунку и овладение техникой микроскопирования.

Цель: Изучить устройство микроскопа и овладеть техникой микроскопирования.

Оснащение работы: Микроскоп, рабочая тетрадь, ручка.

1.Расчехлить микроскоп. 2.Аккуратнопоставить на рабочий стол и осмотреть внешний вид. 3.Изучить основные детали микроскопа и сделать запись в рабочую тетрадь.

1.Зарисовать рисунок микроскопа.2.Описать правила пользования микроскопом.

1 — подставка. 2 — икрометренный винт. 3 — винт грубой наводки. 4 — съемный светофильтр. 5 — коробка с микрометренный винт. 6 — тубусодержатель. 7 — окуляр. 8 — тубус. 9 — револьвер. 10 — Объектив. 11 — предметный столик. 12 — конденсатор. 13 — ирисовая диафрагма. 14 — рукоятка конденсатора. 15 — зеркало.

1.Микроскоп вынимают из футляра и переносят к рабочему месту, держа его одной рукой за ручку штатива, а другой за ножку штатива. Наклонять микроскоп в сторону нельзя, т.к. окуляр может выпасть из тубуса.

Читайте также:  Личность человека с точки зрения философии

2.Микроскоп помещают на рабочем столе на расстоянии 3-5 см от края стола ручкой к себе.

3.Устанавливают правильное освещение поля зрения микроскопа. Для этого, смотря в окуляр микроскопа, зеркалом направляют луч света от настольного осветителя объектив. При правильной установке поля зрения микроскопа будет выглядеть в виде куга хорошо и равномерно освещенного.

4.На предметный столик помещают препарат и закрепляют его клеммами.

5.Сначала препарат рассматривают с объективом 8*, а затем переходят к большим увеличением. Для получения изображения объекта необходимо знать фокусное расстояние (расстояние между объективом и препаратом). При работе с объективом 8* расстояние между препаратом и объективом составляет около 9 мм, с объективом 40* — 0,6 мм и с объективом 90* — 0,15 мм. Тубус микроскопа необходимо осторожно опускать вниз с помощью макрометрического винта. Наблюдая за объективом сбоку, и приблизить его к препарату (не касаясь его) на расстоянии несколько меньше фокусного. Затем, глядя в окуляр, тем же винтом, медленно вращая его на себя , поднимают тубус до тех пор, пока в поле зрения не появиться изображение изучаемого объекта.

После этого вращением макрометрического винта фокусируют объектив так, чтобы изображение объектива стало четким. Макрометрический винт нужно вращать осторожно, но не более чем на полоборота в ту или другую сторону. При работе с иммерсионным объективом на препарат предварительно наносят каплю кедрового масла и, глядя сбоку, макрометрическим винтом осторожно опускают тубус микроскопа так , чтобы кончик объектива погрузился в каплю масла. Затем, глядя в окуляр, тем же винтом очень медленно поднимают тубус до тех пор, пока не появиться изображение . Точную фокусировку производят макрометрическим винтом.

6.При смене объективов следует отрегулировать интенсивность освещения объекта. Опуская или поднимая конденсор, получают желаемую степень освещенности. Например, при просмотре препарата с объективом 8* конденсор опускают, при переходе на объектив 40* несколько поднимают, а при работе с объективом 90* конденсор поднимают вверх до предела.

7.Препарат рассматривают в нескольких местах, передвигая предметный столик с боковыми винтами или передвигая стекло с препаратом вручную. При изучении препарата следует все время пользоваться макрометрическим винтом с тем, чтобы рассмотреть препарат во всей глубине. Перед заменой слабого объектива более сильным место препарата, где расположен изучаемый объект, необходимо поставить точно в центр поля зрения и только после этого повернуть револьвер с объективом.

8.Во время микроскопирования нужно держать оба глаза открытыми и пользоваться ими попеременно.

9.После окончания работы следует снять препарат с предметного столика, опустить конденсор, поставить под тубус объектив 8*, мягкой тканью удалить иммерсионное масло с фронтальной линзы объектива 90* и убрать микроскоп в футляр.

Дата добавления: 2014-01-04 ; Просмотров: 1870 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

источник

Предназначена для создания светового потока, который позволяет осветить объект таким образом, чтобы последующие части микроскопа предельно точно выполняли свои функции. Осветительная часть микроскопа проходящего света расположена за объектом под объективом в прямых микроскопах (например, биологические, поляризационные и др.) и перед объектом над объективом в инвертированных. Подробнее о видах световых микроскопов.

Осветительная часть конструкции микроскопа включает источник света (лампа и электрический блок питания) и оптико-механическую систему (коллектор, конденсор, полевая и апертурная регулируемые/ирисовые диафрагмы).

5. Оптическая часть микроскопа. Как определить увеличение объекта?
ОПТИЧЕСКАЯ СИСТЕМА:

Наблюдательная часть:
-объектив
-окуляр(19)
Осветительная часть: (осветительный аппарат)
конденсор с ирисовой диафрагмой (14)
откидная линза в оправе (18)
зеркало (15)

Объектив– самая важная часть микроскопа, который привинчивается к нижней части тубуса. Объектив в микроскопе находится в непосредственной близости от рассматриваемого предмета, за что он и получил свое название. Он состоит из системы оптических линз, вставленных в латунную оправу, и требует весьма бережного обращения и тщательного ухода (никоим образом не следует надавливать объективом на лежащий на предметном столике препарат, так как это может вызвать повреждение или даже выпадение линзы).

Назначение объектива:

1)Строить в трубе микроскопа изображение, геометрически подобное изучаемому предмету.

2)Увеличивать изображение в то или иное число раз.

3)Выявлять подробности, недоступные невооруженному глазу. Объективы в количестве 2-3штук ввинчиваются в особое приспособление, называемое револьвером (4).

Окуляр – вставляется в верхнюю часть тубуса. В него рассматривается изображение предмета (а не предмет), направленное объективом вверх. Он состоит из системы линз, вставленных в металлический цилиндр. Окуляр строит изображение, увеличивает его, но не выявляет подробности строения.

Конденсор – собирает и концентрирует в плоскости препарата весь свет, отраженный от зеркала. Конденсор состоит из цилиндра (оправы) внутри которого расположены 2 линзы. Поднимая и опуская конденсор можно регулировать освещение препарата.

Диафрагма – расположена в нижней части конденсора. Также как и конденсор служит для регулирования силы света.

Зеркало – служит для улавливания света от источника освещения. Оно подвижно прикреплено под столиком, вращаясь вокруг горизонтальной оси. Зеркало с одной стороны — плоское, с друзой — вогнутое.

6. Правила работы с микроскопом.

При работе с микроскопом необходимо соблюдать операции в следующем порядке:

1. Работать с микроскопом следует сидя;

2. Микроскоп осмотреть, вытереть от пыли мягкой салфеткой объективы, окуляр, зеркало или электроосветитель;

3. Микроскоп установить перед собой, немного слева на 2-3 см от края стола. Во время работы его не сдвигать;

4. Открыть полностью диафрагму, поднять конденсор в крайнее верхнее положение;

5. Работу с микроскопом всегда начинать с малого увеличения;

6. Опустить объектив 8 — в рабочее положение, т.е. на расстояние 1 см от предметного стекла;

7. Установить освещение в поле зрения микроскопа, используя электроосветитель или зеркало. Глядя одним глазом в окуляр и пользуясь зеркалом с вогнутой стороной, направить свет от окна в объектив, а затем максимально и равномерно осветить поле зрения. Если микроскоп снабжен осветителем, то подсоединить микроскоп к источнику питания, включить лампу и установить необходимую яркость горения;

8. Положить микропрепарат на предметный столик так, чтобы изучаемый объект находился под объективом. Глядя сбоку, опускать объектив при помощи макровинта до тех пор, пока расстояние между нижней линзой объектива и микропрепаратом не станет 4-5 мм;

9. Смотреть одним глазом в окуляр и вращать винт грубой наводки на себя, плавно поднимая объектив до положения, при котором хорошо будет видно изображение объекта. Нельзя смотреть в окуляр и опускать объектив. Фронтальная линза может раздавить покровное стекло, и на ней появятся царапины;

источник

Практическая Работа №2

Правила работы с ним»

Выполнил студент группы ТПИ 2.1

Ознакомление с устройством биологического микроскопа.

Зарисовать микроскоп и написать его составные части.

Микроскоп с одним окуляром и двумя сменными объективами на револьверной головке. Увеличение в пределах от 100 до 1000.

Шарнир для наклона;

Ручка микрометренной регулировки;

Ручка грубой регулировки;

Револьверная головка;

Предметный столик;

Нижний держатель;

Описать методы микрокопирования в тетрадь.

Фазовый контраст. Метод получения изображений микроскопических объектов, у элементов структуры которых преломления показатель и способность поглощать оптическое излучение разнятся настолько мало, что эти элементы неразличимы при иных методах наблюдения и получения изображений в микроскопе. В то же время сдвиги фаз световых волн, вносимые такими элементами, могут заметно отличаться один от другого, образуя т. н. «фазовый рельеф», на который не реагируют ни глаз, ни фоточувствительный слой. Метод Ф. к. состоит в преобразовании (с помощью вспомогательного оптического устройства) «фазового рельефа» в изменения интенсивностей (амплитуд) световых волн – в т. н. «амплитудный рельеф», который и регистрируется фотоприёмником.

Расскажите об устройстве биологического микроскопа.

Штативная подставка выполняется в виде тяжелой отливки, обычно подковообразной формы. К ней на шарнире прикреплен тубусодержатель, несущий все остальные части микроскопа. Тубус, в который вмонтированы линзовые системы, позволяет перемещать их относительно образца для фокусировки. Объектив расположен на нижнем конце тубуса. Обычно микроскоп снабжен несколькими объективами разного увеличения на револьверной головке, которая позволяет устанавливать их в рабочее положение на оптической оси. Оператор, исследуя образец, начинает, как правило, с объектива, имеющего наименьшее увеличение и наиболее широкое поле зрения, находит детали, интересующие его, а затем рассматривает их, пользуясь объективом с большим увеличением. Окуляр вмонтирован в конец выдвижного держателя (который позволяет изменять длину тубуса, когда это необходимо). Весь тубус с объективом и окуляром можно передвигать вверх и вниз, наводя микроскоп на резкость.

Образец обычно берется в виде очень тонкого прозрачного слоя или среза; его кладут на прямоугольную стеклянную пластинку, называемую предметным стеклом, и накрывают сверху более тонкой стеклянной пластинкой меньших размеров, называемой покровным стеклом. Образец часто окрашивают химическими веществами, чтобы увеличить контраст. Предметное стекло кладут на предметный столик так, чтобы образец находился над центральным отверстием столика. Столик обычно снабжается механизмом для плавного и точного перемещения образца в поле зрения.

Под предметным столиком находится держатель третьей системы линз – конденсора, который концентрирует свет на образце. Конденсоров может быть несколько, и здесь же располагается ирисовая диафрагма для регулировки апертуры.

Еще ниже расположено осветительное зеркало, устанавливаемое в универсальном шарнире, которое отбрасывает свет лампы на образец, за счет чего вся оптическая система микроскопа и создает видимое изображение. Окуляр можно заменить фотоприставкой, и тогда изображение будет формироваться на фотопленке. Многие исследовательские микроскопы оснащаются специальным осветителем, так что в осветительном зеркале нет необходимости.

Правила работы с биологическим микроскопом.

1. Работать с микроскопом следует сидя;

2. Микроскоп осмотреть, вытереть от пыли мягкой салфеткой объективы, окуляр, зеркало или электроосветитель;

3. Микроскоп установить перед собой, немного слева на 2-3 см от края стола. Во время работы его не сдвигать;

4. Открыть полностью диафрагму, поднять конденсор в крайнее верхнее положение;

5. Работу с микроскопом всегда начинать с малого увеличения;

6. Опустить объектив 8 — в рабочее положение, т.е. на расстояние 1 см от предметного стекла;

7. Установить освещение в поле зрения микроскопа, используя электроосветитель или зеркало. Глядя одним глазом в окуляр и пользуясь зеркалом с вогнутой стороной, направить свет от окна в объектив, а затем максимально и равномерно осветить поле зрения. Если микроскоп снабжен осветителем, то подсоединить микроскоп к источнику питания, включить лампу и установить необходимую яркость горения;

8. Положить микропрепарат на предметный столик так, чтобы изучаемый объект находился под объективом. Глядя сбоку, опускать объектив при помощи макровинта до тех пор, пока расстояние между нижней линзой объектива и микропрепаратом не станет 4-5 мм;

9. Смотреть одним глазом в окуляр и вращать винт грубой наводки на себя, плавно поднимая объектив до положения, при котором хорошо будет видно изображение объекта. Нельзя смотреть в окуляр и опускать объектив. Фронтальная линза может раздавить покровное стекло, и на ней появятся царапины;

10. Передвигая препарат рукой, найти нужное место, расположить его в центре поля зрения микроскопа;

11. Если изображение не появилось, то надо повторить все операции пунктов 6, 7, 8, 9;

12. Для изучения объекта при большом увеличении, сначала нужно поставить выбранный участок в центр поля зрения микроскопа при малом увеличении. Затем поменять объектив на 40 х, поворачивая револьвер, так чтобы он занял рабочее положение. При помощи микрометренного винта добиться хорошего изображения объекта. На коробке микрометренного механизма имеются две риски, а на микрометренном винте — точка, которая должна все время находиться между рисками. Если она выходит за их пределы, ее необходимо возвратить в нормальное положение. При несоблюдении этого правила, микрометренный винт может перестать действовать;

13. По окончании работы с большим увеличением, установить малое увеличение, поднять объектив, снять с рабочего столика препарат, протереть чистой салфеткой все части микроскопа, накрыть его полиэтиленовым пакетом и поставить в шкаф.

Дата добавления: 2019-02-12 ; просмотров: 1269 ; ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ

источник

При работе с микроскопом необходимо соблюдать операции в следующем порядке:

1. Работать с микроскопом следует сидя;

2. Микроскоп осмотреть, вытереть от пыли мягкой салфеткой объективы, окуляр, зеркало или электроосветитель;

3. Микроскоп установить перед собой, немного слева на 2-3 см от края стола. Во время работы его не сдвигать;

4. Открыть полностью диафрагму, поднять конденсор в крайнее верхнее положение;

5. Работу с микроскопом всегда начинать с малого увеличения;

6. Опустить объектив 8 — в рабочее положение, т.е. на расстояние 1 см от предметного стекла;

7. Установить освещение в поле зрения микроскопа, используя электроосветитель или зеркало. Глядя одним глазом в окуляр и пользуясь зеркалом с вогнутой стороной, направить свет от окна в объектив, а затем максимально и равномерно осветить поле зрения. Если микроскоп снабжен осветителем, то подсоединить микроскоп к источнику питания, включить лампу и установить необходимую яркость горения;

8. Положить микропрепарат на предметный столик так, чтобы изучаемый объект находился под объективом. Глядя сбоку, опускать объектив при помощи макровинта до тех пор, пока расстояние между нижней линзой объектива и микропрепаратом не станет 4-5 мм;

9. Смотреть одним глазом в окуляр и вращать винт грубой наводки на себя, плавно поднимая объектив до положения, при котором хорошо будет видно изображение объекта. Нельзя смотреть в окуляр и опускать объектив. Фронтальная линза может раздавить покровное стекло, и на ней появятся царапины;

10. Передвигая препарат рукой, найти нужное место, расположить его в центре поля зрения микроскопа;

11. Если изображение не появилось, то надо повторить все операции пунктов 6, 7, 8, 9;

12. Для изучения объекта при большом увеличении, сначала нужно поставить выбранный участок в центр поля зрения микроскопа при малом увеличении. Затем поменять объектив на 40 х, поворачивая револьвер, так чтобы он занял рабочее положение. При помощи микрометренного винта добиться хорошего изображения объекта. На коробке микрометренного механизма имеются две риски, а на микрометренном винте — точка, которая должна все время находиться между рисками. Если она выходит за их пределы, ее необходимо возвратить в нормальное положение. При несоблюдении этого правила, микрометренный винт может перестать действовать;

Читайте также:  Основные точки зрения на время возникновения науки

13. По окончании работы с большим увеличением, установить малое увеличение, поднять объектив, снять с рабочего столика препарат, протереть чистой салфеткой все части микроскопа, накрыть его полиэтиленовым пакетом и поставить в шкаф.

Задание 1. Используя микроскопы, таблицы и практикумы, изучить устройство световых микроскопов (МИКМЕД-1, БИОЛАМ и МБС-1) (рис. 1). Запомнить названия и назначение их частей.

Задание 2. При малом и большом увеличениях микроскопа научиться быстро находить объекты на постоянных микропрепаратах.

Возьмите предметное стекло из контейнера, держа его за боковые грани. Поместите в центр стекла объект.

Нанесите пипеткой 1–2 капли воды на объект.

Возьмите покровное стекло за боковые грани и положите его боковой гранью на каплю воды, затем медленно опустите на нее стекло.

Внимание! Между стеклами не должно быть пузырьков воздуха, нельзя покровное стекло кидать на каплю сверху, его нужно как бы вдвинуть в каплю сбоку.

Излишки воды уберите фильтровальной бумагой;

Приготовленный микропрепарат поместите на предметный столик и рассмотрите сначала при малом, затем при большом увеличении.

В том случае, если микропрепарат сделан неаккуратно, между стеклами есть пузырьки воздуха, следует повторить действия.

источник

Световые микроскопы одни из самых популярных, недорогих и простых в эксплуатации увеличительных аппаратов. Для освещения исследуемого препарата в них используется простая система – конденсор и диафрагмы. Также они снабжены лампой накаливания, диодным или другим дополнительным источников света. Световые микроскопы бывают монокулярными, например, Микромед С-13 или С-12, Levenhuk Rainbow 2L, и биокулярными, например, Levenhuk LabZZ M4 или стерео Микромед MC-1 вар. 1А (1x/3x). Настройка обоих видов аппарата проста и не займет много времени.

В большинстве микроскопов есть несколько объективов с разной степенью увеличения. Первую настройку микроскопа производят на объективе с наименьшим увеличением:

  • Закрепите рассматриваемый слайд на предметном столике. Приблизьте его к объективу так, чтобы расстояние между ними было 3-4 мм.
  • Поворачивая винт грубой настройки, медленно опускайте вниз столик для слайдов. Это нужно делать до тех пор, пока изучаемый объект не будет хорошо виден в окуляр.
  • Аккуратно вращая винт микронастройки, сделайте изображение четким и качественным.

Если в процессе работы с микроскопом нужно будет изменить степень увеличения, достаточно повернуть револьверную головку до щелчка. Нужно помнить, что объектив с большим увеличением длиннее. Поэтому при повороте можно повредить окуляр или столик.

Биокулярные микроскопы настраиваются так же, как и монокуляры. Только все действия производятся с использованием 1-го окуляра. Второй подстраивается при помощи специального регулировочного кольца. Важно, чтобы, глядя в оба окуляра, исследователь видел 1 четкое изображение.

Перед началом изучения слайдов нужно подготовить рабочее место. Стол и стул должны быть удобными и соответствовать по высоте возрасту и росту исследователя. Если у микроскопа нет дополнительного источника освещения, то аппарат нужно расположить у окна.

  • Перемещают увеличительный прибор держа за низ и тубусодержатель.
  • Микроскоп устанавливают на ровную поверхность в 30-50 мм от края.
  • Мягкой тканью очищают окуляры и объективы.
  • Открывают диафрагму и опускают конденсор.
  • Настраивают освещение так, чтобы источник света не слепил.
  • При работе с химическими препаратами нужно надевать перчатки и защитные очки.
  • С предметным стеклом обращаются аккуратно. Оно очень хрупкое и может расколоться.
  • В монокуляр лучше смотреть каждым глазом попеременно. Так они не будут уставать.

Если объект исследования прозрачный и бесцветный, его можно подкрасить, например, йодом. Это позволит хорошо его рассмотреть. По окончанию работы микроскоп протирают. Объектив устанавливают на наименьшее увеличение. Прибор хранят в коробке или чехле, чтобы не попадала пыль и влага.

Некоторые микроскопы, например, Kromatech 60x мини и Bresser National Geographic 40–640x, снабжены подставками и адаптерами для мобильного телефона. С их помощью выполняют фотосъемку исследуемых слайдов.

Есть модели, которые подключаются к компьютеру. Например, цифровой USB-микроскоп МИКМЕД 2.0 или цифровой Levenhuk DTX 720 WiFi. Такие микроскопы укомплектованы дисками с ПО. Они совместимы с ПК, ноутбуком, а иногда и с планшетом или смартфоном. Изображение выводится на экран. Можно снимать видео или делать фото слайдов.

С микроскопом можно исследовать недоступные глазу частицы. Главное, правильно обращаться с прибором и препаратами!

источник

1. Ознакомление с устройством микроскопа

Поскольку микробиология изучает организмы, большинство из которых невозможно рассмотреть нево­оруженным глазом, для установления их внешней формы, размеров, строения пользуются микроскопом (от греч. micros — малый, scopeo — смотрю). Это оптический прибор, состоящий из механической, осве­тительной и оптической частей (рис. 1).

Рис.1 Микроскоп 1 — основание; 2 — коробка с механиз­мом микрометрической фокусиров­ки; 3 — микрометрический винт; 4 — предметный столик; 5- 6 — винты для перемещения предметного столика; 7 — тубусодержатель; 8 — макрометрический винт; 9 — головка; 10 — тубусс окуляром; 11 — винт для крепления насадки; 12 — револьвер с объективами; 13 — винт, фиксирующий револьвер относительно оси тубуса; 14 — крон­штейн конденсора; 15 — винт пере­мещения конденсора; 16 — конден­сор; 17 — винт для крепления конденсора; 18 — дополнительная линза; 19 — зеркало.

Механическая часть, или штатив микроскопа, состоит из сле­дующих деталей.

Ножка подковообразной или прямоугольной формы, служащая опорой микроскопа.

Тубусодержатель имеет форму дуги и используется в каче­стве ручки при переноске микроскопа.

Тубус — зрительная трубка микроскопа. В верхнее отверстие тубуса свободно вставляется окуляр.

Револьверная насадка крепится к нижней стороне тубуса. Вращая насадку, можно быстро менять ввинченные в нее объек­тивы, во время работы, подводя под тубус любой из них. Объек­тив должен быть, центрирован, т. е. установлен в рабочее поло­жение, при котором главная оптическая ось линз объектива со­впадает с главной оптической осью линз окуляра. Для этого на верхнем диске насадки против объектива имеется желобок, в ко­торый входит ступица (пружинка), закрепляющая объектив. При попадании ступицы в желобок ощущается щелчок.

Предметный столик — устройство, на которое помещают изу­чаемый объект. Препарат, закрепляют имеющимися на столике зажимами (клеммами). В центре предметного столика находится отверстие для прохождения лучей света, освещающих препарат. Предметный столик может передвигаться в двух взаимно перпен­дикулярных направлениях с помощью двух симметрично распо­ложенных на краях столика винтов. Подвижность столика позво­ляет любую точку препарата расположить под объективом. Сто­лик может быть также закреплен неподвижно.

Винты — микро и макро. С их по­мощью тубус можно передвигать вверх и вниз для установления его на необходимом расстоянии от препарата. При вращении винтов по часовой стрелке тубус опускается, при вращении против часовой стрелки — поднимается. Микро­винтом пользуются для ориентировочной грубой установки объектива на «фо­кус», т.е. на то расстояние от препарата, при котором он де­лается видимым. Для точной настройки объектива служит микровинт.

Осветительная часть мик­роскопа состоит из зеркала, конденсора и ирис-диафрагмы, расположенных под предметным столиком микроскопа.

Зеркало имеет две поверхности: плоскую и вогнутую Оно отражает световые лучи и направляет их к конденсору. Обычно при работе зеркало повернуто к свету плоской стороной.

Конденсор — представляет собой систему сильных линз и служит для усиления яркости освещения рассматриваемого объекта. Собирая лучи света, отраженные зеркалом, конденсор концентрирует их в плоскости препарата. Конденсор можно передвигать в вертикальном направ­лении при помощи винта.

Ирис-диафрагма, расположенная под конденсором, состоит из тонких металлических пластинок, которые при помощи ры­чажка можно сдвигать или раздвигать, в результате чего отвер­стие диафрагмы может сужаться или расширяться. Ирис-диа­фрагмой регулируют интенсивность освещения препарата. При малом раскрытии диафрагмы возрастают глубина резкости.

Оптическая часть микроскопапредставлена объективами и окуляром.

Объектив состоит из линз, заключенных в металлическую оправу. Линза, обращенная к предмету, называется фронтальной. Объектив обладает определенной увеличительной способностью иопределенной глубиной фокуса. Чем больше кривизна линз, тем короче фокусное расстояние и больше увеличение объектива. Объектив дает действительное, увеличенное, обратное изображение. На оправе каждого объектива нанесены цифры, показывающие его увеличение. Биологические микроскопы МБР-1, МБИ-1, «Биолам» и другие обычно имеют 3-4 объектива с цифровыми обозначениями 8 x ,20 x ,40 x ,90 x , показывающими их собственное увеличение.

Объективы подразделяют на сухие и иммерсионные. При рассматривании препарата с сухим объективом (8 x , 20 x , 40 x ) между его фронтальной линзой и препаратом находится воздух. Так как лучи света проходят среды с различными показателями преломления (предметное стекло, вода, покровное стекло, воздух), часть их отклоняется и не попадает в объектив. При работе с иммерсионным объективом (90 x ) для устранения светорассеивания расстояние между фронтальной линзой объектива и препаратом заполняют кедровым (иммерсионным) маслом, которое подвергают специальной обработке, в результате чего его показатель преломления света становится примерно таким же, как у стекла. Коэффициент преломления такого кедрового масла равен 1,515, коэффициент преломления стекла — 1,53. Световые лучи при переходе стекла в слой кедрового масла практически не преломляются и, не отражаясь, попадают в объектив. Таким образом достигается наилучшее освещение рассматриваемого объекта. Кроме того, применение иммерсионного масла повышает разрешающую способность микроскопа.

Окуляр (от лат. oculus — глаз) вставляется в верхний конец тубуса и представляет собой систему двух плосковыпуклых линз, обращенных выпуклостью в сторону объектива. Линза, обращенная к глазу, называется глазной, к препарату — собирательной. Биологические микроскопы снабжены тремя сменными окулярами. На оправе верхней линзы окуляра указано его собственное увеличение. Обычно окуляр увеличивает изображение, данное объективом в 7, 10, 15 раз. Для того чтобы определить общее увеличение используемой оптической системы, необходимо увеличение объектива умножить на увеличение окуляра.

Используя биологический микроскоп, можно рассмотреть объект размером не менее 0,2 мкм (микрометр).

Осветитель используют при микроскопировании, применяя часто электрический свет. Для работы применяют специальные осветители ОИ-7, OИ-9 и ОИ -21.

2. Правила пользования микроскопом

Работая с микроскопом, необходимо соблюдать определенные правила обращения с ним.

· Микроскоп вынимают из футляра и переносят к рабочему месту, держа его одной рукой за ручку штатива, а другой, поддерживая за ножку штатива. Наклонять микроскоп в сторону нельзя, так как окуляр может выпасть из тубуса.

· Микроскоп помещают на рабочем столе на расстоянии 3 — 5 см от края стола ручкой к себе.

· Устанавливают правильное освещение поля зре­ния микроскопа. Для этого, смотря в окуляр микро­скопа, зеркалом направляют луч света от настоль­ного осветителя (являющегося источником света) в объектив. Настройка освещения производится с объ­ективом 8 х . При правильной установке поле зрения микроскопа будет выглядеть в виде круга, хорошо и равномерно освещенного.

· На предметный столик помещают препарат и закрепляют его клеммами.

· Сначала препарат рассматривают с объективом 8 х , затем переходят к большим увеличениям.

Для получения изображения объекта необходимо знать фокусное расстояние (расстояние между объ­ективом и препаратом). При работе с объективом 8 х расстояние между препаратом и объективом со­ставляет около 9 мм, с объективом 40 х — 0,6 мм и с объ­ективом 90 х — около 0,15 мм.

Тубус микроскопа необходимо осторожно опускать вниз с помощью макровинта, наблюдая за объективом сбоку, и приблизить его к препарату (не касаясь его) на расстояние, несколько меньшее фокусного. Затем, глядя в окуляр, тем же винтом, медленно вращая его на себя, поднимают тубус до тех пор, пока в поле зрения не появится изображе­ние изучаемого объекта.

После этого вращением микровинта фокусируют объектив так, чтобы изображение объек­тива стало четким. Микровинт нужно вращать осторожно, но не более чем на пол-оборота в ту или другую сторону.

При работе с иммерсион­ным объективом на препарат предварительно наносят каплю кедрового масла и, глядя сбоку, макровинтом осторожно опускают тубус микроско­па так, чтобы кончик объектива погрузился в каплю масла. Затем, глядя в окуляр, тем же винтом очень медленно поднимают тубус до тех пор, пока не по­явится изображение. Точную фокусировку производят микрометрическим винтом.

· При смене объективов следует вновь отрегулировать интенсивность освещения объекта. Опуская или поднимая конденсор, получают желаемую сте­пень освещенности. Например, при просмотре препа­рата с объективом 8 х конденсор опускают, при переходе на объектив 40 х – несколько поднимают, а при работе с объективом 90 х конденсор поднимают вверх до предела.

· Препарат рассматривают в нескольких местах, передвигая предметный столик боковыми винтами или передвигая стекло с препаратом вручную. При изучении препарата следует все время пользоваться микровинтом, с тем, чтобы рассмотреть препарат во всей его глубине.

· Перед заменой слабого объектива более сильным место препарата, где расположен изучаемый объект, необходимо поставить точно в центр поля зрения и только после этого по­вернуть револьвер с объективом.

· Во время микроскопирования нужно держать оба глаза открытыми и пользоваться ими попеременно.

· После окончания работы следует снять препарат. с предметного столика, опустить конденсор, поставить под тубус объектив 8 х , мягкой тканью удалить иммерсионное масло с фронтальной линзы объ­ектива 90 х и убрать микроскоп в футляр.

3. Приготовление препаратов

3.1. Приготовление препарата «раздавленная капля»

1 — краситель; 2- окрашенная часть; 3- неокрашенная часть.

Для приготовления препарата «раздавленная капля» (рис.2) на середину предметного стекла предварительно прокаленной бактериологической петлей наносят каплю из водной суспензии, осторожно накрывают ее и «раздавливают» ее покровным стеклом. Если исследуемый объект «твердый» (например, Mucor), то вначале на предметное стекло помещают каплю воды, а затем в нее помещают объект.

Капля должна тонким слоем заполнить пространство между покровным и предметным стеклами, но не выступать за края покровного стекла.

Излишек выступившей жид­кости удаляют фильтровальной бумагой, если жидкости, мало, ее добавляют. Далее препарат помещают на предметный столик микроскопа и рассматривают с объ­ективом 40 х . Окрашивают препарат фуксином или метиленовой синью.

Капля красителя помешается рядом с покровным стеклом, затем метиленовая синь или фуксин попадают под покровное стекло (см. рис 2.)

Читайте также:  Портит ли зрение чтение при плохом освещении

3.2. Приготовление препарата «висячая капля»

Рис. 3 1 — предметное стекло с лункой; 2 — покровное стекло; 3 — слой вазелина 4 — крышка чашки Петри; 5 — дно чашки Петри; 6 — препарат (капля); 7 — вид сверху. Прим. Чашка Петри используется для хранения препарата.

Посредством этого препарата (рис.3) исследуют микроорганизмы в живом виде, изучая их рост, развитие. Для этого на покровное стекло наносят каплю жидкости с исследуемыми микроорганизмами. Взять специальное предметное стекло с лункой в центре и смазать ее края вазелином. Лункой предметного стекла накрыть каплю исследуемого материала так, чтобы капля находилась в центре лунки. Предметное стекло слегка прижать и быстро перевернуть его. При правильном приготовлении препарата капля свисает в лунку.

3.3. Приготовление фиксированного препарата

Рис. 4 1 — предметное стекло; 2 — препарат.

1. Подготовка предметного стекла (обезжирить).

2. Нанесение мазка. Растягиваем либо петлей, либо краем предметного стекла.

3. Высушивание мазка высоко над пламенем спиртовки.

4. Фиксация мазка тепловым способом (над пламенем) 3-4 раза.

5. Окрашивание. Если окрашиваем метиленовой синью, то залить препарат красителем на 4 -5 мин. Если фуксином, то предварительно на препарат поместить фильтровальную бумагу, смоченную водой, а затем нанести краситель на 1 -2 мин. После окрашивания необходимо снять фильтровальную бумагу.

3.4. Техника окраски по Граму

Заключается она в следующем. На фиксированный мазок наносят 2-3 капли раствора генцианвиолета и через 2-3 мин. окрашивания раствор сливают. На препарат наносят 2-3 капли раствора Люголя и спустя 2-3 мин сливают. Препарат на 30-40 с. погружают в ста­канчик с 96 %-ным раствором спирта и быстро промывают во­дой. Затем препарат в течение 1-2 мин. докрашивают разведен­ным фуксином, промывают водой и просушивают фильтроваль­ной бумагой. Грамположителъные бактерии будут фиолетовыми, грамотрицательные — розоватые, так как обесцвеченные спиртом, они воспринимают дополнительную окраску фуксином.

4. Оформление результатов

· Напишите, из каких двух греческих слов (также укажите их перевод) состоит термин «микроскоп».

· Впишите в таблицу части микроскопа, элементы микроскопа и их назначение.

Часть микроскопа Название элемента микроскопа Назначение элемента микроскопа

· Напишите, от какого латинского слова (также укажите его перевод) произошел термин окуляр.

· Рассчитайте общее увеличение микроскопа,еслиприменяли объектив 8 х и окуляр 10 х .

· Запишите методику приготовления препарата «раздавленная капля».

· Запишите методику приготовления препарата «висячая капля».

· Методика приготовления фиксированного препарата.

· Запишите методику окраски по Граму.

5. Домашнее задание

Подготовиться к защите лабораторной работы №1

Вопросы для контроля

2. Правила пользования микроскопом.

3. Методика приготовления препарата «раздавленная капля».

4. Методика приготовления препарата «висячая капля».

5. Методика приготовления фиксированного препарата.

источник

При работе с микроскопом необходимо соблюдать операции в следующем порядке:

1. Работать с микроскопом следует сидя;

2. Микроскоп осмотреть, вытереть от пыли мягкой салфеткой объективы, окуляр, зеркало или электроосветитель;

3. Микроскоп установить перед собой, немного слева на 2-3 см от края стола. Во время работы его не сдвигать;

4. Открыть полностью диафрагму, поднять конденсор в крайнее верхнее положение;

5. Работу с микроскопом всегда начинать с малого увеличения;

6. Опустить объектив 8 — в рабочее положение, т.е. на расстояние 1 см от предметного стекла;

7. Установить освещение в поле зрения микроскопа, используя электроосветитель или зеркало. Глядя одним глазом в окуляр и пользуясь зеркалом с вогнутой стороной, направить свет от окна в объектив, а затем максимально и равномерно осветить поле зрения. Если микроскоп снабжен осветителем, то подсоединить микроскоп к источнику питания, включить лампу и установить необходимую яркость горения;

8. Положить микропрепарат на предметный столик так, чтобы изучаемый объект находился под объективом. Глядя сбоку, опускать объектив при помощи макровинта до тех пор, пока расстояние между нижней линзой объектива и микропрепаратом не станет 4-5 мм;

9. Смотреть одним глазом в окуляр и вращать винт грубой наводки на себя, плавно поднимая объектив до положения, при котором хорошо будет видно изображение объекта. Нельзя смотреть в окуляр и опускать объектив. Фронтальная линза может раздавить покровное стекло, и на ней появятся царапины;

10. Передвигая препарат рукой, найти нужное место, расположить его в центре поля зрения микроскопа;

11. Если изображение не появилось, то надо повторить все операции пунктов 6, 7, 8, 9;

12. Для изучения объекта при большом увеличении, сначала нужно поставить выбранный участок в центр поля зрения микроскопа при малом увеличении. Затем поменять объектив на 40 х, поворачивая револьвер, так чтобы он занял рабочее положение. При помощи микрометренного винта добиться хорошего изображения объекта. На коробке микрометренного механизма имеются две риски, а на микрометренном винте — точка, которая должна все время находиться между рисками. Если она выходит за их пределы, ее необходимо возвратить в нормальное положение. При несоблюдении этого правила, микрометренный винт может перестать действовать;

13. По окончании работы с большим увеличением, установить малое увеличение, поднять объектив, снять с рабочего столика препарат, протереть чистой салфеткой все части микроскопа, накрыть его полиэтиленовым пакетом и поставить в шкаф.

Задание 1. Используя микроскопы, таблицы и практикумы, изучить устройство световых микроскопов (МИКМЕД-1, БИОЛАМ и МБС-1) (рис. 1). Запомнить названия и назначение их частей.

Задание 2. При малом и большом увеличениях микроскопа научиться быстро находить объекты на постоянных микропрепаратах.

Возьмите предметное стекло из контейнера, держа его за боковые грани. Поместите в центр стекла объект.

Нанесите пипеткой 1–2 капли воды на объект.

Возьмите покровное стекло за боковые грани и положите его боковой гранью на каплю воды, затем медленно опустите на нее стекло.

Внимание! Между стеклами не должно быть пузырьков воздуха, нельзя покровное стекло кидать на каплю сверху, его нужно как бы вдвинуть в каплю сбоку.

Излишки воды уберите фильтровальной бумагой;

Приготовленный микропрепарат поместите на предметный столик и рассмотрите сначала при малом, затем при большом увеличении.

В том случае, если микропрепарат сделан неаккуратно, между стеклами есть пузырьки воздуха, следует повторить действия.

источник

Практические советы Витальное окрашивание Прижизненное окрашивание Домашняя лаборатория Занимательная микроскопия Изготовление микропрепаратов Камера Горяева Классификация и маркировка объективов микроскопов Комбинации цветных стекол для выделения спектра Методы микроскопирования Методы исследования простейших Методы и приемы биологического эксперимента Микроскопия для начинающих Микроскопические измерения Модификации контрастной окраски по Граму Необходимое оборудование Общие методы заключения препаратов Организация и оснащение гистологической лаборатории Освещение по Келлеру Подготовка предметных стекол Поляризационная микроскопия Правила работы с микроскопом Правила ведения лабораторного журнала Приобретение микроскопа Приготовление микропрепаратов членистоногих Техника приготовления гистологических препаратов Фототубус для цифровых камер Формидрон инструкция по применению

Вся современная микроскопия, с помощью которой исследователи стремятся понять, как соотносится получаемое в микроскопе изображение с физико-химической природой препарата, начинается с освещения по Кёллеру.

Система освещения в микроскопе служит для того, чтобы, во-первых, получить равномерно освещенное поле зрения, на котором детали образца могут быть хорошо различимы, и, во-вторых, осветить образец как можно более широким пучком света с целью достичь максимального разрешения мелких деталей.

1. Линза, находящаяся впереди источника света, формирует изображение источника света не в плоскости препарата.

2. Вторая линза (конденсор) переносит изображение поверхности первой линзы на исследуемый образец. Она имеет минимальное фокусное расстояние, чем достигается максимальный раствор конуса света, падающего на образец.

Настройка системы освещения по Келлеру

Фирмы — изготовители микроскопов прилагают подробную инструкцию к каждому типу выпускаемого микроскопа, но в лабораториях описания часто теряются или в них не считают нужным заглядывать.

Подготовка к настройке освещения

Проверьте, что ваш микроскоп имеет коллекторную линзу, которая находится между лампой и конденсором. Эта линза может быть встроена в основание микроскопа, но и в данном случае она устанавливается для того, чтобы проецировать изображение источника света на ирисовую диафрагму конденсора. Когда диафрагма закрыта, при помощи зеркала можно увидеть, так ли это в действительности. Во многих случаях, однако, нить лампы бывает не видна из-за того, что мешает матовое стекло. В таких случаях необходимо просто полностью осветить ирисовую диафрагму конденсора. В некоторых типах микроскопов для этого нет котировочных приспособлений, но принцип остается прежним. Могут иметься винты, центрирующие нить лампы относительно коллекторной линзы. На коллекторной линзе может находиться ирисовая диафрагма, которая называется диафрагмой поля зрения.

Проверьте наличие в микроскопе конденсора и его диафрагмы.

В хороших системах диафрагма находится в передней фокальной плоскости конденсора. Она называется апертурной диафрагмой.

Конденсор может иметь дополнительные приспособления для настройки. В конденсоре с верхней откидной линзой последняя может перемещением рукоятки вводиться или выводиться из хода лучей. В конденсоре альтернативной конструкции имеется нижняя дополнительная линза, которая может вводиться или выводиться из хода лучей. Верхняя откидная линза, будучи введена в ход лучей, уменьшает фокусное расстояние конденсора, в то время как дополнительная нижняя линза во втором случае, если она находится в ходе лучей, увеличивает фокусное расстояние конденсора. Эти переключения влияют на размер изображения апертурной диафрагмы в плоскости препарата. Обратите внимание на возможности центровки конденсора, а также его диафрагмы.

Окуляр можно вынуть и заменить на вспомогательный микроскоп (фазовый телескоп), который может быть сфокусирован на заднюю поверхность объектива, или, более точно, на заднюю фокальную плоскость объектива. Некоторые микроскопы имеют сменные окуляры с вращающейся вспомогательной линзой, которая превращает окуляр в фазовый телескоп. В такой системе также должна быть возможность фокусировки. Проверьте это на вашем микроскопе.

Сфокусируйте как следует изображение полевой диафрагмы, перемещая конденсор вверх или вниз. Обратите внимание, что в процессе фокусировки по краю диафрагмы появится желтая или синяя кайма. Если оба цвета присутствуют вокруг края одновременно, то это следствие плохой юстировки, которую нужно тогда произвести заново.

Отцентрируйте изображение полевой диафрагмы. В большинстве случаев для этого используются центровочные винты конденсора. Для проверки центровки раскрывайте полевую диафрагму до тех пор, пока ее граница не приблизится вплотную к краю поля зрения.

Откройте полевую диафрагму так, чтобы ее граница была вне поля зрения. Именно на этом этапе обнаруживается, что для объективов с малым увеличением изображение полевой диафрагмы недостаточно велико, чтобы заполнить все поле зрения. В этом случае следует либо откинуть верхнюю линзу, либо ввести добавочную нижнюю линзу. После этого конденсор должен быть вновь сфокусирован, как указано выше.

Выньте окуляр, вставьте фазовый телескоп (или переключите сменную окулярную линзу) и сфокусируйте его на заднюю фокальную плоскость (з. ф. п.) объектива. В том, что фокус наведен, можно убедиться, увидев в поле зрения диафрагму конденсора. Чтобы удостовериться в этом, откройте и закройте диафрагму конденсора. Микроскоп может быть снабжен приспособлением для ее центровки по отношению к з. ф. п. объектива. Если оно есть, то проделайте эту операцию (будьте осторожны, чтобы не нарушить центровочными винтами положение конденсора, которое вы уже установили).

Установите такой размер апертурной диафрагмы, чтобы ее изображение занимало около 70% з. ф. п. объектива. Вы увидите, что блики с боковых поверхностей тубуса микроскопа исчезают по мере того, как вы производите юстировку.

Вы можете также заметить изображение нити лампы в центре ярко освещенного пятна. Это правильно. Если есть возможность центрировать апертурную диафрагму, отцентрируйте ее по отношению к объективу и затем, используя центровочные винты лампы, отцентрируйте в свою очередь и ее. Наличие матового стекла приведет к тому, что это изображение будет нечетким, так что центрировать придется по максимальной яркости.

Вставьте окуляр и убедитесь, что вы достигли наилучшей ситуации для данных положений объектива и конденсора. При излишней яркости освещенность нельзя уменьшать, регулируя размер освещенной апертуры. Регулировка интенсивности освещения детально рассмотрена на этапе 10.

При смене объектива проверьте этапы 3—6. Вы увидите, что некоторая юстировка нужна на этапе 6 и минимальная— на остальных этапах. Затем пройдите этап 7, где необходимо существенно изменить размер освещенного пятна апертурной диафрагмы, для того чтобы она соответствовала числовой апертуре (NA) нового объектива.

При визуальной микроскопии яркость изображения может регулироваться изменением напряжения на лампе. Однако снижение напряжения приведет к преобладанию в спектре теплых тонов из-за увеличения красной и уменьшения синей составляющих. Этот метод непригоден для целей фотографии. Как при визуальной микроскопии, так и при фотомикрографии интенсивность света может быть ослаблена с помощью нейтральных серых светофильтров, которые устанавливаются перед конденсором.

Установка света по Кёллеру

1. Включите свет и отцентрируйте его, следуя инструкции фирмы-изготовителя.

2. Взяв контрастный препарат, содержащий окрашенные компоненты, сфокусируйте его, используя объектив Х10.

3. Глядя в окуляры, постепенно закрывайте полевую диафрагму до тех пор, пока она не станет видна в плоскости образца. Она может быть/не быть четко сфокусирована и может быть/не быть в центре поля зрения.

4. Сфокусируйте как следует изображение полевой диафрагмы, перемещая конденсор вверх или вниз. Обратите внимание, что в процессе фокусировки по краю диафрагмы появится желтая или синяя кайма. Если оба цвета присутствуют вокруг края одновременно, то это следствие плохой юстировки, которую нужно тогда произвести заново.

5. Отцентрируйте изображение полевой диафрагмы. В большинстве случаев для этого используются центровочные винты конденсора. Для проверки центровки раскрывайте полевую диафрагму до тех пор, пока ее граница не приблизится вплотную к краю поля зрения.

6. Откройте полевую диафрагму так, чтобы ее граница была вне поля зрения. Именно на этом этапе обнаруживается, что для объективов с малым увеличением изображение полевой диафрагмы недостаточно велико, чтобы заполнить все поле зрения. В этом случае следует либо откинуть верхнюю линзу, либо ввести добавочную нижнюю линзу. После этого конденсор должен быть вновь сфокусирован, как указано выше

источник